案例一分析:CRISPR-Cas9技術(shù)敲除酵母菌ADE1基因
泓迅生物利用CRISPR-Cas9技術(shù)編輯酵母菌中的一個920bp的ADE1基因。ADE1是腺嘌呤合成相關(guān)基因,如果ADE1失活,則細(xì)胞將會積累紅色色素,呈現(xiàn)紅色菌落。
陽性克隆菌落
測序結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)化子的ADE1基因缺失了18個堿基,被成功編輯。
案例二分析:CRISPR-Cas9技術(shù)將熒光蛋白基因敲入大腸桿菌
泓迅生物研究人員通過開發(fā)完善CRISPR-Cas9雙質(zhì)粒基因編輯系統(tǒng)及其生產(chǎn)工藝,成功將906bp的紅色熒光蛋白(mScarlet)編碼基因敲入到菌株E.coli的NC101基因組上 Clbp編碼區(qū)域,敲入成功率高達(dá)96.6%~100%。
圖1 mScarlet基因敲入后克隆子的PCR鑒定電泳圖
圖2 mScarlet基因敲入后大腸桿菌基因組序列。(a)敲入位點(diǎn)上下游基因圖譜及測序組裝示意圖,(b)敲入位點(diǎn)上下游測序序列峰形圖。
圖3 熒光顯微鏡下大腸桿菌NC101突變株細(xì)胞圖像。(a)白光下細(xì)胞圖片,(b)594 nm光源激發(fā)后細(xì)胞圖片。