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穩(wěn)定細胞株構(gòu)建

穩(wěn)定細胞株構(gòu)建是指將外源DNA克隆到具有某種抗性或者選擇基因的載體上，轉(zhuǎn)染宿主細胞后，利用載體中所含的選擇標志進行篩選，得到可穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株。

泓迅生物提供一系列穩(wěn)定細胞株構(gòu)建服務，用于全長抗體及抗體片段、Fc融合蛋白、多種細胞表面受體、胞質(zhì)和分泌蛋白等重組蛋白/抗體的穩(wěn)定及規(guī)模化生產(chǎn)。

服務優(yōu)勢

外源基因嚴格鑒定，細胞無污染
CHO1.0穩(wěn)轉(zhuǎn)載體，配合嘌呤霉素+MTX篩選系統(tǒng)
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及Pool篩選，周期8周左右
可對重組蛋白/抗體全長或片段進行個性化表達

服務詳情

服務項目	服務詳情	轉(zhuǎn)染方式	系統(tǒng)	項目周期	驗證方式	交付項目
常規(guī)過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株構(gòu)建	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及pool篩選	? 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 ? 慢病毒轉(zhuǎn)染	293T、Hela、A549等	2-3周	Western Blot、免疫熒光（IF）驗證	? 穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株pool
常規(guī)過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株構(gòu)建	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及單克隆篩選，篩選至少20個單克隆細胞株	? 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 ? 慢病毒轉(zhuǎn)染	293T、Hela、A549等	5-6周		? 1-3株穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株 ? 表達報告
抗體穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及pool篩選	? 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染	CHO1.0	8周		? 穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株pool

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服務流程

案例分享查看詳細

泓迅生物將GFP序列構(gòu)建到CHO 1.0載體上，然后將構(gòu)建好的GFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到CHO細胞中進行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及Pool篩選，獲得GFP-CHO穩(wěn)轉(zhuǎn)株，經(jīng)過多輪藥物篩選后，顯微鏡下觀察熒光細胞所占比例大于90%。

GFP-CHO穩(wěn)轉(zhuǎn)株陽性率

常見問題

構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株有必要嗎？

如果您需要對過表達或者表達降低目的基因的細胞進行反復試驗，那么構(gòu)建穩(wěn)定細胞株是有必要的。
第一，可以減少不同批次實驗中轉(zhuǎn)染效率差異帶來的實驗結(jié)果差異，提高實驗的可重復性。
第二，構(gòu)建好細胞系后不必再進行瞬時轉(zhuǎn)染實驗以及反復制備質(zhì)粒，減少工作量。
第三，不再使用價格高昂的轉(zhuǎn)染試劑，節(jié)約實驗成本。

所有細胞株都可以構(gòu)建穩(wěn)定細胞系嗎？

不是所有的細胞株都能構(gòu)建成為穩(wěn)定細胞系的。構(gòu)建穩(wěn)定細胞系需要滿足2個條件：

1、細胞能穩(wěn)定傳代；

2、細胞的轉(zhuǎn)染效率滿足要求。

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